ارزیابی روابط ژنتیکی تنوع انواع سیب به کمک مارکر SSR

ارزیابی روابط ژنتیکی تنوع انواع سیب به کمک مارکر SSR

نشانگر SSR
ژنوم ارقام سیب
سطح مولكول DNA
مارکر مولکولی ریزماهواره
مارکر مولکولی SSR
روابط ژنتیکی ارقام و پایه های سیب
بررسی تنوع ژنتیکی سیب
تنوع ژنتیکی سیب با نشانگر SSR
شناسایی مولکولی ارقام و پایه های سیب توسط نشانگر SSR
ارزیابی روابط ژنتیکی تنوع انواع سیب به کمک مارکر SSR

رفتن به سایت اصلی

دانلود پایان نامه کارشناسی ارشد رشته کشاورزی

ارزیابی روابط ژنتیکی تنوع انواع سیب به کمک مارکر SSR

(مطالعه موردی: نهالستان بخش تحقیقات باغبانی موسسه اصلاح نهال)

 

 

 

 

چکیده:

ثبت و شناسایی ارقام و پایه های گیاهی و تعیین رابطه ژنتیکی بین آنها مستلزم دسترسی به روشهای دقیق و قابل تکراری که از شرایط محیطی متأثر نباشد، می باشد. روشهای سنتی تعیین هویت بر اساس مشاهده ظاهری درخت و میوه است.  با توجه به اینکه بسیاری از خصوصیات ظاهری تحت تأثیر عوامل محیطی قرار می گیرند، این روش قابل اعتماد نیست.با استفاده از نشانگرها در سطح ملکول DNA می توان اطلاعات دقیقی از ژنوم گیاهان بدست آورد.از جمله نشانگرهای معتبر در بررسی ژنوم سیب، نشانگر SSR است که بدلیل تکرارپذیری بالا، ایجاد الگوی باندی نسبتاً ساده و توارث همبارز در بررسی تنوع ژنتیکی و شناسه دار کردن ارقام و  پایه های سیب کارایی بالایی دارد.

 

در بررسی حاضر از 5 جفت نشانگر پلی مورفیک SSR بر روی 24 رقم و پایه سیب بمنظور تهیه شناسنامه ژنتیکی برای بعضی از ارقام و پایه ها و همچنین تعیین رابطه ژنتیکی بین آنها استفاده شد. نمونه های برگی از کلکسیون سیب جمع آوری و DNA آنها استخراج شدند و سپس با استفاده از نشانگرهای اختصاصی SSR مورد تکثیر قرار گرفتند.  پس از الکتروفورز عمودی در دستگاه توالی یاب  DNA در ژل پلی آکریل آمید و رنگ آمیزی نیترات نقره در مجموع 52 آلل پلی مورفیک در 5 لوکوس ریزماهوار ( میانگین 4/10 در هر لوکوس) شناسایی شدند.

تجزیه کلاستر بطور جداگانه برای ارقام و پایه ها بر اساس حضور و عدم حضور باند با استفاده از برنامه NTSYS و ضریب تشابه Dice  مبتنی بر UPGMA انجام گرفت.  دندوگرام حاصل از ارقام نشان داد که ارقام مورد بررسی تنوع زیادی داشتند و در 6 کلاستر جای گرفتند و سیبهای گلاب مورد بررسی توسط این 5 جفت نشانگر از هم تفکیک شدند.  در دندوگرام پایه ها شباهت دو پایه MM111و  MM106 مشاهده گردید.با استفاده از 3 آغازگر (CH01H01,02B1,CH02B10) باندهای اختصاصی در ارقام (24 رقم) مشاهده شد. همچنین اگوی نواربندی اختصاصی برای بعضی از ارقام در هر آغازگر بدست آمد.  در نهایت این 5 آغازگر توانستند آللهای اختصاصی مربوط به پایه ها را تعیین کنند.

 

 

کلمات کلیدی:

مارکر SSR

شناسایی مولکولی

ارقام و پایه های سیب

 

 

مقدمه   

مهمترین درختان میوه ای که در مناطق معتدله و سردسیری به صورت اهلی درآمده‌اند در خانواده گلسرخیان  قرار دارند مانند سیب، گلابی، آلوچه، گیلاس و….. .  سیب از نظر اقتصادی بیشترین اهمیت را در بین محصولات درختی مناطق معتدله و سردسیری دارد و تعداد زیادی از ارقام تجاری آن به دلیل گرده‌افشانی باز، تلاقی‌های كنترل شده و یا تلقیح موتاسیون سوماتیكی با ارقام سازگار، قابل استفاده در برنامه‌های اصلاحی اند. یك مشكل قابل توجه در صنعت سیب و فراورده های آن تعیین هویت ارقام آن می‌باشد. روشهای سنتی تعیین هویت بر اساس مشاهده ظاهری درخت ومیوه است. با توجه به اینكه بسیاری از خصوصیات ظاهری تحت تأثیر عوامل محیطی قرار  می گیرند، این روش، قابل اعتماد نیست. روش دیگر برای تعیین هویت ارقام استفاده از نشانگر می باشد. استفاده از نشانگرها در سطح مولكول DNA  دقیق ترین روش بررسی است که جزئیات بیشتری از ژنوم ارقام سیب را ارائه می‌دهد. ازجمله نشانگرهای معتبردر بررسی ژنوم سیب، نشانگر  SSRاست که به دلیل قابلیت تکرارپذیری بالا، ایجاد الگوی باندی نسبتاً ساده و توارث هم بارز، در بررسی تنوع ژنتیکی و شناسه دار کردن ارقام سیب کارایی بالایی دارد. در این تحقیق با استفاده از نشانگرهای منتخب SSR تنوع ژنتیکی 29 رقم و پایه سیب و امکان دستیابی به نوارهای اختصاصی DNA در هر یک از ارقام و پایه ها مورد بررسی قرار گرفت.

 

 

 

 

فهرست مطالب

چکیده: 1

مقدمه 2

 

فصل اول:بررسی منابع و کلیات 3

1-1- تاریخچه و گسترش سیب در جهان 4

2-1- درخت سیب و خواص بتانیكی آن 5

3-1- فرآورده‌های سیب 6

4-1- خواص دارویی سیب 6

5-1- ارزش غذایی سیب 7

6-1- پایه‌های سیب 8

1-6-1-پایه‌های بذری 8

2-6-1- پایه‌های رویشی(غیر بذری) 9

1-2-6-1-پایه‌های مالینگ 9

2-2-6-1- پایه های مالینگ مرتون 10

3-2-6-1-پایه های بوداگوسکی 11

7-1- زیست شناسی مولكولی 11

1-7-1- نشانگر 11

2-7-1- هدف از كاربرد نشانگر 11

3-7-1- انواع نشانگرهای ژنتیكی 12

1-3-7-1- نشانگرهای ریخت‌شناسی (مورفولوژیكی) 12

2-3-7-1- نشانگرهای سیتوژنتیكی 12

3-3-7-1- نشانگرهای ملکولی در سطح پروتئین 12

4-3-7-1- نشانگرهای مولكولی در سطح  DNA 13

5-3-7-1- انواع نشانگرهای DNA 14

الف) نشانگرهای DNA غیر مبتنی بر PCR

– تفاوت طول قطعات حاصل از هضم (RFLP)  14

–  تعداد متفاوت ردیف‌های تكراری و ماهوارك‌ها (VNTR   & Minisatellites)  15

–  پویش ژنومی نشانه‌های هضم (RLGS)  15

ب) نشانگرهای DNA مبتنی بر PCR 15

4-7-1- ردیف‌های تكراری 17

1-4-7-1- ماهواره‌ها 18

2-4-7-1- ماهوارك‌ها 18

3-4-7-1- ریز ماهواره‌ها (میكروستلایت‌ها یا SSR) 19

5-7-1- چگونگی ایجاد میكروستلایت‌ها 20

6-7-1- خصوصیات نشانگرهای SSR 20

7-7-1- كاربردهای نشانگرهای SSR 21

8-7-1- مزایای ریز ماهواره ها 21

9-7-1- معایب ریز ماهواره‌ها 22

10-7-1- اساس چند شكلی در جایگاههای ریزماهواره 23

1-10-7-1-  مدل کراسینگ اور نا متقارن (UCO)  23

2-10-7-1- مدل سر خوردن پلیمراز هنگام همانند سازی(SSM) 24

8-1- واكنش زنجیره ای پلیمراز 24

1-8-1- اجزای واکنش PCR 24

1-1-8-1- آنزیم 24

2-1-8-1-مخلوط ذروكسی نوكلئوتید تری فسفات ( dNTPs ) 25

3-1-8-1-  DNA الگو 25

4-1-8-1-  آغازگرها 25

5-1-8-1- بافرها و كلرید منیزیوم 26

2-8-1- عوامل مؤثر براختصاصی بودن واكنش PCR 26

1-2-8-1- غلظت مخلوط  PCR 26

2-2-8-1- دما 27

3-2-8-1- تعداد و طول سیكل 27

4-2-8-1- افزاینده های PCR 27

3-8-1- (TD-PCR) Touch Down PCR 27

4-8-1- PCR  آشیانه ای 28

9-1- الكتروفورز ژل آگارز 28

10-1- الكترفورز ژل پلی آكریل آمید 29

11-1- مروری بر تحقیقات انجام شده توسط نشانگر SSR 29

 

فصل دوم مواد و روشها 31

1-2- مواد گیاهی 32

2-2- استخراج DNA 36

1-2-2- استخراجDNA به روش دلاپورتا 36

2-2-2- استخراج DNA به روش  CTAB 37

3-2- تعیین کیفیت نمونه های DNA 38

4-2- تعیین کمیت نمونه های DNA 39

5-2- PCR 39

1-5-2- اجزای واکنش  زنجیره‌ای پلیمراز 39

1-1-5-2- آغازگرها 39

2-1-5-2- آنزیم Taq DNA polymerase 40

3-1-5-2- بافر PCR 41

4-1-5-2- کلرید منیزیوم 41

5-1-5-2- dNTP 41

2-5-2- بهینه سازی واکنش زنجیره‌ای پلیمراز 42

6-2- الكتروفورز فراورده های PCR 43

1-6-2- الكتروفورز افقی در ژل آگارز 43

2-6-2- الكتروفورز عمودی در ژل پلی آکریل آمید 43

1-2-6-2- تیمار شیشه‌ها 44

2-2-6-2- تزریق ژل 44

3-2-6-2- گرم نمودن ژل 45

4-2-6-2- واسرشته سازی محصولات PCR 45

3-6-2 رنگ آمیزی ژل 46

7-2- تجزیه و تحلیل داده ها 47

1-7-2- امتیازدهی باندها 47

2-7-2- تجزیه خوشه ای 48

3-7-2-تعیین اندازه باندها و الگوی نواربندی اختصاصی 48

 

فصل سوم نتیجه گیری و بحث 49

1-3- نتایج استخراج DNA 50

2-3- بهینه سازی دمای اتصال آغازگرها 52

3-3- بهینه سازی روش PCR 52

4-3- بررسی نهایی نتایج حاصل از PCR 52

5-3- بررسی چند شکلی های SSR 54

6-3- بررسی و تحلیل روابط خویشاوندی بین ارقام 57

7-3- تعیین شناسنامه ژنتیکی برای ارقام 60

7-3- تعیین شناسنامه ژنتیکی برای ارقام 61

1-7-3- تعیین آللهای اختصاصی 61

2-7-3- الگوی نواربندی اختصاصی در ارقام 61

8-3- بررسی میزان خویشاوندی بین پایه ها 64

9-3- تعیین شناسنامه ژنتیکی برای پایه ها 65

1-9-3- تعیین آللهای اختصاصی 65

 

فصل چهارم:نتیجه گیری کلی و پیشنهادات 75

نتیجه گیری کلی 80

پیشنهادات 84

ضمائم 87

منابع و مآخذ: 90

 

 

مبانی نظری و پیشینه تحقیق نظریه های روانشناسی

مبانی نظری و پیشینه تحقیق نظریه های روانشناسی مبانی نظری نظریه های روانشناسی اخلاق دانلود مبانی نظری نظریه های روانشناسی اخلاق پیشینه تحقیق نظریه های روانشناسی اخلاق ادبیات نظری نظریه های روانشناسی اخلاق فصل دوم پایان نامه نظریه های روانشناسی…

گزارش کارآموزی رشته حسابداری با عنوان عملیات بانكداری

گزارش کارآموزی رشته حسابداری با عنوان عملیات بانكداری ارزش پولی نظام بانکی عملیات بانكداری تاریخچه بانکداری در ایران دانلود گزارش کارآموزی دانلود گزارش کارآموزی رشته حسابداری دانلود گزارش کارآموزی عملیات بانكداری رفتن به سایت اصلی دانلود گزارش کارآموزی رشته حسابداری…

چارچوب نظری و پیشینه پژوهش ارزش گذاری برند برای مشتری

چارچوب نظری و پیشینه پژوهش ارزش گذاری برند برای مشتری مبانی نظری ارزش گذاری برند برای مشتری دانلود مبانی نظری ارزش گذاری برند برای مشتری پیشینه ارزش گذاری برند برای مشتری ادبیات نظری ارزش گذاری برند برای مشتری فصل دوم…

مبانی نظری امکان پیاده سازی هزینه یابی بر مبنای فعالیت در شرکتها

مبانی نظری امکان پیاده سازی هزینه یابی بر مبنای فعالیت در شرکتها پیاده سازی ABC هزینه یابی بر مبنای فعالیت پیاده سازی هزینه یابی بر مبنای فعالیت پیاده سازی هزینه یابی بر مبنای فعالیت در سازمان الگوی دو بعدی هزینه‌یابی…

پرسشنامه بررسی مولفه‌های موثر بر ترغیب مردم به سپرده گذاری در بانک‌های دولتی و خصوصی

پرسشنامه بررسی مولفه‌های موثر بر ترغیب مردم به سپرده گذاری در بانک‌های دولتی و خصوصی پرسشنامه مولفه‌های موثر بر ترغیب مردم پرسشنامه سپرده گذاری در بانک‌های دولتی و خصوصی پرسشنامه مولفه‌های موثر بر ترغیب مردم به سپرده گذاری پرسشنامه سپرده…

خوشه بندی فازی (Fuzzy Clustering)

خوشه بندی فازی (Fuzzy Clustering) کلاسترینگ خوشه بندی کلاسترینگ فازی خوشه بندی فازی هدف از خوشه بندی الگوریتمهای خوشه بندی دانلود مقاله خوشه بندی فازی دانلود مقالات رشته هوش مصنوعی رفتن به سایت اصلی دانلود مقاله رشته هوش مصنوعی با…

پایان نامه کارشناسی رشته الهیات و معارف اسلامی با عنوان حضرت محمد (ص)

پایان نامه کارشناسی رشته الهیات و معارف اسلامی با عنوان حضرت محمد (ص) انبیاى الهى دین اسلام حضرت محمد (ص) دانلود پایان نامه کارشناسی رشته الهیات و معارف اسلامی با عنوان حضرت محمد (ص) سیستم همکاری در فروش فایل همکاری…

پاورپوینت هوش معنوی - مجموعه مدیریت

پاورپوینت هوش معنوی - مجموعه مدیریت پاورپوینت هوش معنوی رفتن به سایت اصلی پاورپوینت هوش معنوی به تعداد 56 اسلاید کارشناسی ارشد - دکتری مناسب اساتید و ارائه (سمینار) دانشجویان   مقدمه تاریخچه تعاریف انواع هوش در نظریه ها پیش…

پاورپوینت استانداردهای حسابداری ایران

پاورپوینت استانداردهای حسابداری ایران استانداردهای حسابداری ایران رفتن به سایت اصلی پاورپوینت استانداردهای حسابداری ایران شامل 32 فایل پاورپوینت قابل ویرایش مناسب اساتید و کنفرانس دانشجویان   1نحوه ارائه صورتهای مالی 2صورت جریان وجوه نقد 3درآمد عملیاتی 4(ذخایر,بدهیهای احتمالی و…

  • چارچوب نظری و پیشینه پژوهش شاخص های عملکردی بیمارستان
  • چارچوب نظری و پیشینه پژوهش شاخص های عملکردی بیمارستان مبانی نظری شاخص های عملکردی بیمارستان دانلود مبانی نظری شاخص های عملکردی بیمارستان پیشینه تحقیق شاخص های عملکردی بیمارستان ادبیات نظری شاخص های عملکردی بیمارستان فصل دوم پایان نامه شاخص های…

  • مدل ها و نظریه های سنجش و سلامت اداری
  • مدل ها و نظریه های سنجش و سلامت اداری سنجش سلامت اداری شاخص های سنجش سلامت اداری سنجش سلامت اداری مقاله سلامت اداری مقاله در مورد سلامت اداری مولفه های سلامت اداری تحقیق در مورد سلامت اداری مقاله سلامت نظام…

  • طلاق و عوامل آن در ایران
  • طلاق و عوامل آن در ایران طلاق آمارهای طلاق گرایش به طلاق عوامل طلاق در ایران طلاق و عوامل آن در ایران دانلود پایان نامه علوم اجتماعی دانلود پایان نامه طلاق دانلود پایان نامه عوامل طلاق در ایران رفتن به…

  • پاورپوینت تخمین تراوایی با استفاده از نمودارهای چاه پیمایی،تحلیل اطلاعات آنالیز مغزه و کاربرد منطق فازی در آن
  • پاورپوینت تخمین تراوایی با استفاده از نمودارهای چاه پیمایی،تحلیل اطلاعات آنالیز مغزه و کاربرد منطق فازی در آن تخمین تراوایی با استفاده از نمودارهای چاه پیمایی،تحلیل اطلاعات آنالیز مغزه و کاربرد منطق فازی در آن رفتن به سایت اصلی دانلود…

  • چارچوب نظری و پیشینه پژوهش سبک های فرزندپروری
  • چارچوب نظری و پیشینه پژوهش سبک های فرزندپروری مبانی نظری سبک های فرزندپروری دانلود مبانی نظری سبک های فرزندپروری پیشینه تحقیق سبک های فرزندپروری ادبیات نظری سبک های فرزندپروری فصل دوم پایان نامه سبک های فرزندپروری مبانی نظری و پیشینه…

  • فایل های pdf درس حفاظت پیشرفته در سیستم های قدرت دکتر صادقی راد
  • فایل های pdf درس حفاظت پیشرفته در سیستم های قدرت دکتر صادقی راد فایل های pdf درس حفاظت پیشرفته در سیستم های قدرت دکتر صادقی راد رفتن به سایت اصلی فایل های pdf درس حفاظت پیشرفته در سیستم های قدرت…

  • چارچوب نظری و پیشینه پژوهش رفتار شهروندی سازمانی کارکنان
  • چارچوب نظری و پیشینه پژوهش رفتار شهروندی سازمانی کارکنان مبانی نظری رفتار شهروندی سازمانی دانلود مبانی نظری رفتار شهروندی سازمانی پیشینه تحقیق رفتار شهروندی سازمانی ادبیات نظری رفتار شهروندی سازمانی فصل دوم پایان نامه رفتار شهروندی سازمانی مبانی نظری و…

  • نظریه رشد شناختی ویگوتسکی و نظریه رشد شناختی برونر درس روان شناسی تربیتی
  • نظریه رشد شناختی ویگوتسکی و نظریه رشد شناختی برونر درس روان شناسی تربیتی نظریه رشد شناختی ویگوتسکی و نظریه رشد شناختی برونر درس روان شناسی تربیتی رفتن به سایت اصلی نظریه رشد شناختی ویگوتسکی و نظریه رشد شناختی برونر درس…

  • سیستم رتبه بندی سایتها
  • سیستم رتبه بندی سایتها اسکریپت سایت برتر انتخاب سایت برتر دانلود اسکریپت دسته بندی سایت ها دانلود اسکریپت دایرکتوری دانلود اسکریپت فارسی سایت برتر رفتن به سایت اصلی اسکریپتی قوی برای راه ادازی سیستم لیست وب سایت های برتر. در…

  • پرسشنامه استاندارد عملکرد تحصیلی ept فام و تیلور - 1999
  • پرسشنامه استاندارد عملکرد تحصیلی ept فام و تیلور - 1999 پرسشنامه عملکرد تحصیلی فام و تیلور پرسشنامه عملکرد تحصیلی فام و تیلور (ept) پرسشنامه عملکرد تحصیلی فام و تیلور 1999 دانلود پرسشنامه عملکرد تحصیلی فام و تیلور پرسشنامه استاندارد عملکرد…

  • بررسی خاکهای مساله دار و روشهای بهسازی آنها در ایران
  • بررسی خاکهای مساله دار و روشهای بهسازی آنها در ایران بهسازی خاک خاکهای مساله دار خاکهای تثبیت شده روشهای بهسازی خاکهای مساله دار بررسی خاکهای مساله دار و روشهای بهسازی آنها در ایران دانلود پایان نامه عمران دانلود پایان نامه…

  • پاورپوینت ارتباط بین پزشک و بیمار
  • پاورپوینت ارتباط بین پزشک و بیمار پاورپوینت ارتباط بین پزشک و بیمار رفتن به سایت اصلی پاورپوینت ارتباط بین پزشک و بیمار به تعداد 22 اسلاید قابل ویرایش مناسب اساتید و ارائه دانشجویان   شامل مباحث : حساسیت شغلی پزشکی…

  • ماشین حساب با استفاده از میكروكنترلر 8051
  • ماشین حساب با استفاده از میكروكنترلر 8051 ماشین حساب با استفاده از میكروكنترلر 8051 میكروكنترلر 8051 ریز پردازنده‌ها دانلود پروژه ماشین حساب با استفاده از میكروكنترلر 8051 دانلود پروژه الکترونیک دانلود پروژه رشته الکترونیک رفتن به سایت اصلی دانلود پروژه…

  • ارائه روشی تلفیقی جهت ارزیابی عملکرد و کارایی شرکت های گاز
  • ارائه روشی تلفیقی جهت ارزیابی عملکرد و کارایی شرکت های گاز ارزیابی عملکرد شهرکهای صنعتی ارزیابی عملکرد سازمانی چیست ارزیابی عملکرد سازمان چیست ارزیابی عملکرد سازمان شاخص های ارزیابی عملکرد سازمان ها مدل های نوین ارزیابی عملکرد سازمانی پایان نامه…

  • مبانی نظری و پیشینه تحقیق سیستم های IDS
  • مبانی نظری و پیشینه تحقیق سیستم های IDS مبانی نظری سیستم های IDS دانلود مبانی نظری سیستم های IDS پیشینه تحقیق سیستم های IDS ادبیات نظری سیستم های IDS فصل دوم پایان نامه سیستم های IDS مبانی نظری و پیشینه…

  • مبانی نظری و پیشینه تحقیق ارزیابی عملکرد 8
  • مبانی نظری و پیشینه تحقیق ارزیابی عملکرد 8 مبانی نظری ارزیابی عملکرد دانلود مبانی نظری ارزیابی عملکرد دانلود پیشینه تحقیق ارزیابی عملکرد پیشینه تحقیق ارزیابی عملکرد ادبیات نظری ارزیابی عملکرد فصل دوم پایان نامه ارزیابی عملکرد ادبیات و مبانی نظری…

  • ارزیابی پخش بار بهینه UPFC با شبیه سازی نرم افزاری
  • ارزیابی پخش بار بهینه UPFC با شبیه سازی نرم افزاری محیطهای تجدید ساختار ادوات FACTS کنترل کننده یکپارچه كنترل کننده یكپارچه توان ارزیابی پخش بار بهینه UPFC با شبیه سازی نرم افزاری ارزیابی پخش بار بهینه UPFC بررسی پخش بار…

  • بررسی تشخیصی سونوگرافی و لاپاراسکوپی در عدم نزول بیضه اسب
  • بررسی تشخیصی سونوگرافی و لاپاراسکوپی در عدم نزول بیضه اسب بررسی عدم نزول بیضه اسب تشخیصی لاپاراسکوپی در عدم نزول بیضه اسب تشخیصی سونوگرافی در عدم نزول بیضه اسب درمان عدم نزول بیضه اسب با لاپاراتومی درمان عدم نزول بیضه…

  • پاورپوینت تصمیم گیری و تعیین خط مشی دولتی
  • پاورپوینت تصمیم گیری و تعیین خط مشی دولتی پاورپوینت تصمیم گیری و تعیین خط مشی دولتی تصمیم گیری و تعیین خط مشی دولتی انواع خط مشی های عمومی خط مشی های تقنینی خط مشی های اجرایی خط مشی های قضائی…

  • مراجع بین المللی حاکم بر اِشغال و عوامل موثر بر آن
  • مراجع بین المللی حاکم بر اِشغال و عوامل موثر بر آن اِشغال نظامی تحولات قانونی اِشغال عوامل موثر بر وضع قوانین اِشغال مراجع بین المللی حاکم بر اِشغال مراجع بین المللی حاکم بر اِشغال و عوامل موثر بر آن منابع…

    پاسخی بگذارید

    نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *